Mikroskopi pendarfluor telah merevolusikan keupayaan kita untuk memvisualisasikan dan mengkaji spesimen biologi, membolehkan kita menyelidiki dunia sel dan molekul yang rumit. Komponen utama mikroskop pendarfluor ialah sumber cahaya yang digunakan untuk merangsang molekul pendarfluor dalam sampel. Selama bertahun-tahun, pelbagai sumber cahaya telah digunakan, masing-masing dengan ciri dan kelebihannya yang unik.
1. Lampu Merkuri
Lampu merkuri tekanan tinggi, antara 50 hingga 200 watt, dibina menggunakan kaca kuarza dan berbentuk sfera. Ia mengandungi sejumlah merkuri di dalamnya. Apabila ia beroperasi, nyahcas berlaku di antara dua elektrod, menyebabkan merkuri tersejat, dan tekanan dalaman dalam sfera meningkat dengan cepat. Proses ini biasanya mengambil masa kira-kira 5 hingga 15 minit.
Pembebasan lampu merkuri tekanan tinggi terhasil daripada perpecahan dan pengurangan molekul merkuri semasa nyahcas elektrod, yang membawa kepada pancaran foton cahaya.
Ia memancarkan cahaya ultraungu dan biru-ungu yang kuat, menjadikannya sesuai untuk pelbagai bahan pendarfluor yang menarik, itulah sebabnya ia digunakan secara meluas dalam mikroskop pendarfluor.
2. Lampu Xenon
Satu lagi sumber cahaya putih yang biasa digunakan dalam mikroskop pendarfluor ialah lampu xenon. Lampu Xenon, seperti lampu merkuri, menyediakan spektrum panjang gelombang yang luas daripada ultraungu kepada inframerah dekat. Walau bagaimanapun, mereka berbeza dalam spektrum pengujaan mereka.
Lampu merkuri menumpukan pelepasannya di kawasan berhampiran ultraungu, biru dan hijau, yang memastikan penjanaan isyarat pendarfluor terang tetapi datang dengan fototoksikiti yang kuat. Akibatnya, lampu HBO biasanya dikhaskan untuk sampel tetap atau pengimejan pendarfluor yang lemah. Sebaliknya, sumber lampu xenon mempunyai profil pengujaan yang lebih lancar, membolehkan perbandingan keamatan pada panjang gelombang yang berbeza. Ciri ini berfaedah untuk aplikasi seperti pengukuran kepekatan ion kalsium. Lampu Xenon juga mempamerkan pengujaan yang kuat dalam julat inframerah dekat, terutamanya sekitar 800-1000 nm.
Lampu XBO mempunyai kelebihan berikut berbanding lampu HBO:
① Keamatan spektrum yang lebih seragam
② Keamatan spektrum yang lebih kuat di kawasan inframerah dan pertengahan inframerah
③ Keluaran tenaga yang lebih besar, menjadikannya lebih mudah untuk mencapai apertur objektif.
3. LED
Dalam beberapa tahun kebelakangan ini, pesaing baharu telah muncul dalam bidang sumber cahaya mikroskop pendarfluor: LED. LED menawarkan kelebihan pensuisan hidup-mati pantas dalam milisaat, mengurangkan masa pendedahan sampel dan memanjangkan jangka hayat sampel halus. Tambahan pula, lampu LED mempamerkan pereputan yang cepat dan tepat, mengurangkan fototoksisiti dengan ketara semasa eksperimen sel hidup jangka panjang.
Berbanding dengan sumber cahaya putih, LED biasanya memancarkan dalam spektrum pengujaan yang lebih sempit. Walau bagaimanapun, berbilang jalur LED tersedia, membolehkan aplikasi pendarfluor pelbagai warna yang serba boleh, menjadikan LED pilihan yang semakin popular dalam persediaan mikroskop pendarfluor moden.
4. Sumber Cahaya Laser
Sumber cahaya laser sangat monokromatik dan berarah, menjadikannya ideal untuk mikroskopi resolusi tinggi, termasuk teknik resolusi super seperti STED (Stimulated Emission Depletion) dan PALM (Photoactivated Localization Microscopy). Cahaya laser biasanya dipilih untuk memadankan panjang gelombang pengujaan khusus yang diperlukan untuk fluorofor sasaran, memberikan selektiviti dan ketepatan yang tinggi dalam pengujaan pendarfluor.
Pilihan sumber cahaya mikroskop pendarfluor bergantung pada keperluan eksperimen khusus dan ciri sampel. Sila hubungi kami jika anda memerlukan sebarang bantuan
Masa siaran: Sep-13-2023